純化磁珠是一種用于純化生物樣品的新型材料。它可以通過(guò)磁性吸附的方式快速、高效地從混雜的生物樣品中分離出目標(biāo)分子,如蛋白質(zhì)、DNA或RNA等。
純化磁珠的工作原理:
工作原理是基于磁性吸附技術(shù)。所謂磁性吸附,即是利用磁性微粒的磁性將目標(biāo)分子吸附在磁珠表面,然后通過(guò)磁力將磁珠和吸附的分子分離出來(lái),從而實(shí)現(xiàn)分離純化的目的。
制備:
主要是由磁性微粒和作用于微粒表面的官能化試劑組成。通常采用配體、抗體、親和素等官能化試劑對(duì)磁性微粒表面進(jìn)行修飾,使其具有特異性識(shí)別和吸附目標(biāo)分子的能力。
制備的方法有多種,最為常用的就是交聯(lián)反應(yīng)法。具體方法是將磁性微粒和交聯(lián)劑混合,在水溶液中反應(yīng),生成交聯(lián)磁性微粒,并用細(xì)胞孔徑分離技術(shù)分離所得的交聯(lián)磁性微粒,最后采用官能化試劑進(jìn)行修飾。
純化方法:
通常,純化磁珠的純化方法可以分為兩種:手工操作和自動(dòng)化操作。手工操作的方法較為簡(jiǎn)單,適用于小規(guī)模操作。自動(dòng)化操作的方法則適用于大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。
手工操作的純化方法一般包括以下步驟:
1.磁珠預(yù)處理:將磁珠分散在緩沖液中,加入磁性分離架(磁珠分離器)靜置5-10分鐘,磁性分離架和磁珠之間的吸附力會(huì)使磁珠沉降到磁性分離架的底部;
2.磁珠清洗:將磁性分離架和磁珠從混合物中移開(kāi),洗滌吸附在磁珠上的目標(biāo)分子;
3.磁珠復(fù)蘇:用純的緩沖液重懸沉淀下來(lái)的磁珠,從而得到目標(biāo)分子從磁珠中脫離的純化產(chǎn)品。
在自動(dòng)化操作的純化方法中,通常采用毒理性較低、穩(wěn)定性較高、流動(dòng)性較好的磁珠,然后使用自動(dòng)化純化儀器對(duì)樣品進(jìn)行處理。這種方法具有大規(guī)模純化的優(yōu)點(diǎn),但也需要專業(yè)人員進(jìn)行操作和維護(hù)設(shè)備。