以平底微孔板的形式開展分子和細(xì)胞分析已然成為當(dāng)下的熱潮。這不僅能夠大大提高通量,還能夠減少試劑用量和降低實驗成本。如今的微孔板檢測儀提供多種檢測模式,包括光吸收、熒光和發(fā)光檢測等,可應(yīng)用在生命科學(xué)研究的各個方面。
現(xiàn)在我們就來介紹一下平底微孔板檢測的幾大類應(yīng)用。
細(xì)胞研究
對于生命科學(xué)研究而言,細(xì)胞是*的一部分。在開展細(xì)胞相關(guān)的實驗時,人們除了檢測細(xì)胞增殖外,還廣泛使用各種熒光染料、熒光蛋白以及抗體來檢測細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞狀態(tài)以及蛋白靶點的活性。因此,微孔板檢測主要應(yīng)用于細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡的檢測,以及信號通路的分析。
細(xì)胞活力
健康的細(xì)胞才能保證高品質(zhì)的實驗結(jié)果。因此,細(xì)胞活力的評估是許多實驗的環(huán)節(jié)。代謝活性通常被認(rèn)為是細(xì)胞活力的指標(biāo),這可通過細(xì)胞還原電位來評估。此外,評估細(xì)胞膜完整性也是一種簡便的方法。在此過程中,微孔板檢測提供了整個細(xì)胞群的信息,而不是跟蹤單個細(xì)胞的行為。
活細(xì)胞固有的還原能力可作為代謝活性的指標(biāo)。在測定細(xì)胞群體的還原電位時,信號與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。
細(xì)胞膜完整性也是細(xì)胞活力檢測的通用指標(biāo)。只有在細(xì)胞膜受損時,DNA結(jié)合染料才能進(jìn)入細(xì)胞,因此DNA染色可作為細(xì)胞死亡的標(biāo)志。
細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡早期的一個顯著特征是Caspase酶的激活,它參與蛋白底物的裂解和隨后的細(xì)胞解體。微孔板檢測可以對活細(xì)胞以及細(xì)胞裂解液或提取物中的活性Caspase進(jìn)行分析?;谖⒖装宓腸aspase分析通常是采用熒光和顯色檢測。它利用caspase酶的活性和特別設(shè)計的報告底物來產(chǎn)生熒光或顯色的信號,這可通過微孔板檢測儀來讀取。
細(xì)胞增殖
細(xì)胞增殖分析對于細(xì)胞的生長和分化研究是至關(guān)重要的,在藥物開發(fā)期間常用于評估化合物毒性和腫瘤細(xì)胞生長的抑制。增殖檢測通常是基于DNA含量或細(xì)胞代謝,或者是定量DNA的合成。通過微孔板檢測平臺,人們可高通量地開展細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性或藥物功效研究。