為什么磁珠分選器被稱為細胞分選的利器?看完你就知道了
更新時間:2021-04-20 點擊次數(shù):1156
用免疫磁珠做細胞分選是高效簡捷的免疫細胞及其它細胞的分離純化方法,今天,借著我們跟大家聊一下MACS(magnetic-activatedcellsorting)磁珠分選器的原理及在腫瘤研究中的應(yīng)用,希望對大家有用。
磁珠分選器原理:
MACS分選是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場中通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在分選柱內(nèi),而無該種表面抗原的細胞由于不能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合而沒有磁性,不在分選柱內(nèi)停留,進而使細胞得以分離。分為有柱式分選和無柱式分選。
分選策略
(1)有柱式分選-陽性分選(磁珠標記的細胞為目的細胞)
①磁珠標記:樣品與磁珠孵育15min左右;
②陰性組分先行流出:孵育后的樣品過柱處理,標記磁珠的細胞在磁場的作用下吸附到MACS分選柱子上,沒有被標記的細胞(陰性組分)先行流到試管中;
③洗脫陽性組分:把MACS分選柱子從磁分選器上拿下來,這時磁珠是沒有磁力的,故洗脫獲得陽性組分,收集后用于做后續(xù)實驗。
(2)有柱式分選-去除分選/陰性分選(磁珠標記的細胞為非目的細胞)
①磁珠標記:非目的細胞被生物素化的抗體混合物標記,然后使用抗生素MACS微珠進行磁性標記;
②陽性組分先行流出:孵育后的樣品過柱處理,標記磁珠的細胞在磁場的作用下吸附到MACS分選柱子上,沒有被標記的細胞(目的細胞)先行流到試管中,收集后用于做后續(xù)實驗。
(3)多重分選策略-獲得多參數(shù)細胞
一般是先“陰性分選”再“陽性分選”
(4)血磁珠分選技術(shù)
MACSxpress技術(shù)可以直接從全血中用去除分選的方法分離到目的細胞,不需要ficoll離心和裂解紅細胞。MACSxpress系統(tǒng)包括分選試劑、混勻器和分選器,其中,分選器不太一樣,具有很好的兼容性,5ml,15ml和50ml的離心管都能使用。